Condiciones para la amplificación de microsatélites en cultivares de papa

Resumen

La identificación de cultivares de papa, Solanum tuberosum L., es de suma importancia para el manejo de bancos de germoplasma, programas de mejoramiento genético, análisis de diversidad genética, procesos de micropro­pagación y producción de semilla. Por su alto grado de polimorfismo, los microsatélites (SSR) han demostrado ser una herramienta muy poderosa para análisis de varia­bilidad, ademas es reproducible. El objetivo del trabajo fue estandarizar las condiciones para la amplificación de ADN utilizando cuatro accesiones provenientes del Banco de germoplasma del INIA-Mérida usando marcadores microsatélites. La extracción del ADN se realizó con un rápido, económico y confiable método. De los 24 inicia­dores propuestos para estudios de diversidad se seleccio­naron por su mayor contenido polimórfico12 marcadores. Los productos amplificados se resolvieron en geles de agarosa al 3%, teñido con bromuro de etidio. Se proba­ron  diferentes  métodos  utilizados  en  estudios  previos para diversidad genética e identidad en papa, siendo la de reducciones en las concentraciones de Taq polimerasa, cloruro de magnesio e iniciadores, así como en los tiempos del perfil térmico, la que permitió obtener patrones de fragmentos de ADN nítidos, precisos y reproducibles. Se establecieron concentraciones óptimas de 0,2 U de Taq polimerasa, 1,5 mM de MgCl2 y 0,2 µMM de iniciadores y se redujo 30 min en cada amplificación, obteniéndose una mayor eficiencia por reacción. De los 12 iniciadores, cuatro fueron seleccionados basados en su polimorfismo y la calidad de los fragmentos de ADN amplificados