Método de extracción de la pectina metilesterasa (EC 3.1.1.11) en frutos de níspero

Resumo

El níspero (Manilkara zapota [L.] ‘Prolific’) es un fruto cuyas dificultades de manejo postcosecha ha limitado su comercialización. Durante la maduración del fruto el cambio más drástico es la pérdida de firmeza, lo cual ocasiona la disminución de la calidad. Este ablandamiento está asociado a  la  acción  de  la  pectina  metilesterasa  (PME, E.C. 3.1.1.11), la cual es una enzima que induce la degradación de la pared celular. El objetivo del trabajo fue diseñar un método de extracción de PME eficiente, de calidad, rápido y que utilice pocos reactivos. Se utilizaron frutos de níspero en estado de madurez fisiológica del Banco de Germoplasma INIA-CENIAP,  estado  Aragua,  almacenados  a-20 °C. Se diseñaron cinco métodos de extracción: Buffer  Tris  Hcl;  Buffer  PBS;  Nitrógeno  líquido (N₂L). Buffer Tris HCl + N L y NaCl. Se evaluaron los métodos en función de la calidad de la enzima; cantidad (mg mL^-1 de proteína) y de extracción. En el análisis de varianza se detectaron diferencias altamente  significativas  (P<0,01)  entre  los métodos. La prueba de comparación entre medias de  Duncan  determinó  que  el  Método  de  N L extrajo mayor cantidad de proteína (231 mg ml-¹) con una actividad catalítica de 1,97 µmol ácido min^-1, superando al grupo y control con valores que oscilan  entre  0,13  µmol  ácido  min^-1 y  0,6 µmol ácido min^-1; siendo entonces, el método más eficiente, con mayor rendimiento y menor tiempo (dos horas). Se recomienda la purificación y caracterización de la PME con fines de aplicación agroindustrial y biotecnológico.